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乳疾灵片内淫羊藿苷含量检测

来源:搜集整理   日期:2020-06-02   点击数:

本文作者:明延波1 孟祥军2 吕洁1 作者单位:1.辽宁卫生职业技术学院 2.沈阳医学院

乳疾灵片淫羊藿、赤芍、丹参、青皮、牡蛎、海藻等12味中药材,经加工制成的片剂,乳疾灵颗粒收载于中国药典一部及部颁标准,我们在此基础上,改变剂型制备成片剂,乳疾灵片具有舒肝解郁,散结消痈之功效,临床上用于肝郁气滞、痰淤互结所致的乳癖。为了保证产品质量,选择测定淫羊藿苷作为质量控制的一个指标。淫羊藿苷为淫羊藿中的主要活性成分[1],有关淫羊藿苷的测定方法,文献报道有薄层扫描法[2-3]、高效液相色谱法[4-5]等,本文采用分离效果好、专属性强的HPLC法,通过研究提取工艺和优化色谱条件测定了其中淫羊藿苷的含量,结果满意,重现性好,可用于本制剂的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪(UV200Ⅱ大连依利特科学仪器有限公司);SrAdv Express色谱工作站;UV200Ⅱ检测器。电子天平(AL2O4梅特勒-托利多上海称重设备公司)。

1.2试药

淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110659-200315,供含量测定用);乙腈(色谱纯,山东禹王实业总公司化工厂);其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱HypersilC18(250mm×4.6mm,5μm),柱温为室温;以0.075mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH至4.5)-乙腈(73∶27)为流动相,流速1.0mL/min;检测波长为270nm;进样量为20μL,理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000。

2.2对照品溶液的制备

取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品10mg,精密称定,置100mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取17mL,置50mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。

2.3供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品10片,除去包衣,研细,取1.84g(约4片重),精密称定,置100mL具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,密塞,称定重量,放置过夜,超声处理(功率250W,频率33kHz)20min,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4检测波长的确定

精密称取淫羊藿苷对照品适量,加流动相制成每1mL中约含10μg的溶液,摇匀,照紫外分光光度法,在190~500nm处扫描,溶液在230nm波长处有最大吸收,确定检测波长为270nm。

2.5系统适用性试验

取供试品(040710批)与淫羊藿阴性对照制剂各约10g,照暂定的供试品溶液制备方法,制备供试品溶液与阴性对照溶液。取淫羊藿苷对照品溶液(34μg/mL)、供试品溶液与阴性对照溶液各20μL,测定。对照品色谱中,主峰理论板数为5507.09,供试品溶液色谱中,主峰与对照品溶液色谱峰保留时间对应一致,淫羊藿苷峰理论板数为5645.81,与其他组分分离度为2.21。阴性对照液色谱中,未出现对应峰,表明其他成分不干扰淫羊藿苷的测定。

2.6线性关系考察

精密量取对照品溶液(0.1mg/mL)14.0,15.5,17.0,18.5,20.0mL分别置50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,各精密吸取20μL,分别注入液相色谱仪中,测定色谱峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,淫羊藿苷对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=28.774X-142.73,相关系数r=0.9994。结果表明,在28.0~40.0μg/mL浓度范围内,淫羊藿苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.7精密度试验

照含量测定项下,制备供试品溶液,精密量取20μL,按上述色谱条件连续进样6次,平均值为88.38,RSD为1.50%。本法的精密度良好。

2.8重现性试验

照含量测定项下,分别制备6份供试品溶液,按上述色谱条件进样测定,平均值为887.93,RSD为1.28%。表明本法的重现性良好。

2.9稳定性试验

精密吸取供试品(040710批)溶液20μL,在上述色谱条件下,按0、2、4、6、8h时间间隔测定,平均值为879.56,RSD为1.49%。结果表明供试品溶液在8h内稳定。

2.10回收率试验考察

取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品10mg,精密称定,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取17mL,置50mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作为对照品溶液。取重量差异项下的本品50片,除去包衣,研细,取1.84g(约4片重),精密称定,置100mL具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,密塞,称定重量,放置过夜,超声处理(功率250W,频率33kHz)20min,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。作为供试品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,测定,测得供试品中淫羊藿苷的含量为939.87μg/g。取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品25mg,精密称定,置250mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取170mL,置500mL量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作为加样用对照品溶液。取上述已经测定含量的供试品药粉,分别精密称定约1.2g、2.0g、2.7g各3份,置100mL具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,密塞,称定重量,放置过夜,超声处理(功率250W,频率33kHz)20min,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。作为加样用溶液。精密量取上述各溶液20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,测定含量,计算加样回收率,平均回收率为100.13%,RSD为2.22%(n=9)。结果见表1。

2.11阴性溶液的制备

取缺淫羊藿苷的阴性样品,按供试品制备方法制备成阴性供试液,在上述色谱条件下进样测定。结果表明,对照品溶液和供试品溶液均有相应的峰出现,在淫羊藿苷相应的保留时间处阴性液无吸收峰,处方中的其它成分不影响淫羊藿苷的含量测定。

2.12样品测定

为制定含量限度,制备供试品三批,并与市售颗粒剂(批号4030048)比较。按上述测定方法,测定其中淫羊藿苷的含量,结果见表2。根据上述测定结果,并参照中国药典有关品种的含量规定,暂定本品每片含淫羊藿苷(C33H40O15)计,不得少于0.22mg。

3讨论

(1)提取溶剂的考察:在制备供试品溶液时,分别采用甲醇超声、乙醇超声、水超声、0.1mol/L氨水超声、甲醇回流、乙醇回流的方法考察样品提取方法,结果以乙醇超声提取效果最佳。(2)选择适宜的流动相是含量测定的关键所在,实验中曾选用甲醇、水、冰醋酸为流动相,改变不同比例均不能达到理想的保留时间和分离效果;,选用乙腈、水、冰醋酸为流动相,调整比例后可以使保留时间适宜,使分离度和理论塔板数均符合要求。

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