林怀美 文细娇 彭敏 刘裕韩
潮州市湘桥区妇幼保健院
摘 要：
目的 分析妊娠早期或中期开展产前地中海贫血筛查的临床价值。方法 采用地贫初筛（血液分析MCV、MCH）结合地贫复筛（Hb电泳分析）的简捷经济检测步骤，指导后续地贫基因诊断，对在潮州市湘桥区妇幼保健院进行产前地贫筛查的2 664例受检者进行检测，统计并记录受检者的筛查结果和地贫基因类型。结果 2 664例受检者经地贫初筛，筛查出阳性地贫患者410例，阳性率为15.39%；再经过地贫复筛检测出阳性患者358例，阳性率为13.44%。地贫筛查出阳性患者358例参加地贫基因检测，检出地贫236例，检出率65.92%，其中α-地贫165例，检出率46.09%；β-地贫68例，检出率18.99%；α复合β-地贫3例，检出率0.84%。结论 通过地贫初筛和复筛的手段指导后续地贫基因诊断，有利于地贫携带者检出，避免重症地贫儿的出生，临床应用价值较高。
关键词：
地中海贫血 产前 基因检测 临床价值
Value analysis of prenatal thalassemia screening
Lin Huaimei Wen Xijiao Peng Min
The Xiangqiao District Maternal and Child Health Hospital of Chaozhou City;
Abstract：
Objective To carry out antenatal thalassemia screening in the early or middle trimester of pregnancy,to prevent the birth of children with severe thalassemia. Methods The simple economic detection steps of thalassemia primary screening(blood analysis MCV,MCH)combined with thalassemia recovery screening(Hb electrophoresis analysis)were used to guide the subsequent gene diagnosis of thalassemia. 2664 subjects screened for thalassemia in Xiangqiao District Maternal and Child Health Hospital of Chaozhou City were tested. The screening results and gene types of thalassemia were counted and recorded. Results 2664 patients were screened for thalassemia,Screening of 410 cases of positive thalassemia,The positive rate was 15.39%. and then through re-screening 358 patients were positive for thalassemia. The positive rate was 13.44%. 358 cases of thalassemia positive patients participated in the detection of thalassemia gene,236 cases of thalassemia were detected,the detection rate was 65.92%. Among them,165 cases of α-thalassemia were detected,the detection rate was 46.09%,68 cases of β-thalassemia were detected,18.99%,and 3 cases of α compound β-thalassemia were detected,the detection rate was 0.84%. Conclusion As a diagnostic method of thalassemia,thalassemia screening(including primary screening and repeated screening) can greatly reduce the social and economic burden and waste of medical resources,and has good application value.
Keyword：
Thalassemia; Prenatal; Gene detection; Guiding value;
目前潮州地区婚前、孕前优生健康检查参检率较低，地中海贫血（简称地贫）筛查往往到孕期才引起重视，针对这种现实情况，以及孕前无查孕期必查的原则，开展产前地贫筛查工作就显得尤为重要。地贫是世界上最常见的遗传性溶血性贫血疾病，也是危害最严重的血红蛋白病之一[1,2]。该病在世界广泛分布，在国内以南方的两广、云贵、四川为高发地区，α、β地贫基因携带率高达15.35%和6.64%[3,4]。目前地贫尚无有效治疗方法，对于孕前未接受地贫筛查的夫妇，孕期要动员其及早接受地贫产前筛查，防止重症地贫儿出生，是目前控制地贫发生最为有效的措施。本文对在潮州市湘桥区妇幼保健院进行产前地贫筛查的2 664例检查结果进行分析，旨在加强妊娠早期或中期地中海贫血筛查力度，有利于地贫携带者的检出，避免重症地贫儿出生。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选取2017年2月—2019年1月在潮州市湘桥区妇幼保健院就诊进行地贫筛查的受检者共2 664例，平均年龄（27.50±5.02）岁。以基因检测为诊断标准，确诊α-地贫患者165例，平均年龄（26.37±5.22）岁；确诊β-地贫患者68例，平均年龄（27.82±4.69）岁；确诊α复合β-地贫患者3例，平均年龄（26.75±5.13）岁。
1.2 方法
1.2.1 初筛
所有受检者均进行血常规检查，采集静脉血2 m L，应用日本XS-900i全自动五分类血液分析仪，分析血红蛋白（hemoglobin,Hb）、平均红细胞体积（mean corpuscular volume,MCV）和平均血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin,MCH），其中检测结果MCV<82 f L或MCH<27 pg，即诊断为地贫初筛阳性[5]。
1.2.2 复筛
诊断为地贫初筛阳性者，采集静脉血2 m L，并进行抗凝处理及Hb电泳分析。采用CAPILLARYS 2FLEX PIERCING全自动毛细血管电泳仪并严格按仪器标准操作规程进行室内质量控制。
Hb电泳分析结果Hb A2<2.5%即显示α-地中海贫血阳性；Hb A2>3.5%即显示β-地中海贫血阳性；Hb F>2.0%显示α复合β-地中海贫血阳性；存在异常Hb区带（Hb H、Hb Bart's）显示Hb H病[6]。
1.2.3 基因检测
地贫复筛阳性患者采集静脉血2 m L，全血DNA进行基因检测。采用亚能生物公司生产的试剂盒，对研究对象进行α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因分析。α-地贫缺失基因采用gap-PCR（跨跃断裂点gap-polymerase chain reaction）的技术原理进行检测，可同时检测3种（--SEA、-α3.7和-α4.2）缺失型α-地贫。β-地贫基因检测采用PCR-RDB（反向点杂交法reverse dot blot），能检测出β-珠蛋白基因的17种突变状况[7]。非缺失型α-地贫基因检测也采用PCR-RDB，能检测出中国人常见的α-珠蛋白基因的3种点突变（αCSα、αQSα和αWSα）[8]。
1.3 评价指标
根据《地中海贫血预防控制操作指南》[9]，α-地贫基因分类：静止型为缺失1个α基因（如-α/αα或1个α基因突（如αα/ααT）；轻型为缺失2个α基因（如--/αα或-α/-α）或2个α基因突变（如ααT/ααT）；中间型为缺失3个α基因（如--/-α）或缺失与突变混合（如--/ααT）；重型为缺失4个α基因（--/--）或者缺失与突变混合（--/αTα）。
若夫妇为同型地中海贫血，需进行产前诊断，在妊娠16周后通过脐带血穿刺术或羊膜腔穿刺术取脐带血或羊水进行基因检查，术前采用B超进行定位，在B超引导下进行手术。对于诊断结果为中间型或重型地贫的胎儿，需进行引产。
2 结果
2.1 地贫初筛和复筛结果
在2 664例受检者中，经血液分析MCV、MCH，初筛检测出疑似地贫（MCV<82 f L和MCH<27 pg平行检测）患者410例，阳性率为15.39%(410/2 664）；再经过地贫复筛（Hb电泳分析）检测出阳性患者358例，阳性率为13.44%(358/2 664）。见表1。
表1 地贫初筛复筛结果
2.2 基因检测结果
地贫复筛阳性患者358例参加地贫基因检测，检出地贫236例，检出率65.92%(236/358）。其中，检出α-地贫165例，检出率46.09%，占本次所有受检者的6.19%；检出β-地贫68例，检出率18.99%，占本次所有受检者的2.55%；检出α复合β-地贫3例，检出率0.84%，占本次所有受检者的0.11%。见表2。
表2 地贫基因检出情况（%）
3 讨论
地中海贫血（地贫）是一种常见隐性基因遗传病，会导致溶血性贫血，包括α-地贫和β-地贫[10]。α-地贫又分静止型、轻型、中间型和重型。若夫妻均为同型地贫基因携带者，则他们的胎儿有1/4的可能为中间或重型地贫患儿[11]。轻型地贫在儿童期容易发生轻度贫血，影响发育，成年人多无症状；中间型地贫表现为中度贫血，需要定期输血治疗；重型α-地贫患儿出生即死亡或胎死腹中，孕妇容易出现妊娠并发症；重型β-地贫患儿一般出生3个月～12个月开始出现严重贫血，终身需要输血和去铁治疗[12,13]。相关研究报道，地贫在全球出生缺陷中排第三，每年出生约2.9万人[14]。两个轻型地贫基因携带者结婚生育是中间或重型地贫发生的原因，广东是地贫基因携带率较高省份[15]。
在本次研究的2 664例受检者中，地贫初筛（MCV<82 f L和MCH<27 pg平行检测）阳性患者410例，经地贫复筛（Hb电泳分析）阳性患者358例，阳性率为13.44%。通过地贫基因检测检出地贫基因携带者236例，检出率65.92%，占本次所有受检者的8.86%(236/2 664）。其中，检出α-地贫检出率46.09%，占本次所有受检者的6.19%；检出β-地贫68例，检出率18.99%，占本次所有受检者的2.55%；检出α复合β-地贫3例，检出率0.84%，占本次所有受检者的0.11%。本次检出结果α-地贫基因携带者多于β-地贫基因携带者。
目前通过基因检测的诊断与鉴别仍是地贫诊断的金标准，但基因检测有技术复杂、历时较长、费用较高等缺点，极大地限制了其在临床血检中的广范普及，不能作为普通筛查手段[16,17]。因此，采用准确度高、检测简捷、经济有效的检查手段作为临床诊断显得尤为重要，而且经过地贫初筛和复筛能初步判断孕期夫妻α-地贫和β-地贫的类型，然后指导携带地贫的孕期夫妻进行基因诊断，从而发现同型地贫夫妻，通过抽取羊水或脐带血进行产前诊断，及时发现重症地贫胎儿，再建议终止妊娠，避免重症地贫儿的出生[18]。
综上所述，通过地贫初筛和复筛的手段指导后续地贫基因诊断，有利于地贫携带者的检出，避免重症地贫儿出生，临床应用价值较高，值得推广。
参考文献
[1]石之麟，王沙燕，戴勇.地中海贫血分子诊断的研究进展[J].中国生育健康杂志，2003,14(3):189-190.
[2]陈萍.α地中海贫血分子基础与临床研究现状[J].广西医学，2004,26(5):619-621.
[3]张宏秀，单可人，惠春林，等.应用PCR-RDB技术对β-地中海贫血进行快速产前基因诊断[J].中华围产医学杂志.2002,5(4):248-250.
[4]周玉球，徐湘民.中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断[J].国外医学·遗传学分册，1995,18(3):132-137.
[5]谭诗，李秋红，陈霞，李春莉.地中海贫血筛查的临床应用价值[J].检验医学，2018,33(8):730-733.
[6]李红萍，李培培，张轩，等.MCV与MCH联合血红蛋白电泳筛查常见地中海贫血[J].检验医学，2015,30(7):703-706.
[7]杨夕，汪文明，张体永，等.361例孕产妇珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析[J].检验医学与临床，2014.11(23):3314-3315.
[8]张美婵，许雪梅.地中海贫血基因诊断对指导优生优育的价值分析[J].中国实用医药，2018,13(4):45-46.
[9]代宏剑，温柏平，杨俊逸.地中海贫血的实验室诊断进展[J].国际检验医学杂志，2011,32(2):251-252.
[10]梁志洪，王云秀，刘冬冬，等.广东地区地中海贫血基因携带者全血细胞计数结果分析[J].热带医学杂志，2014,14(7):846-849.
[11]朱宝生，贺静，张杰，等.云南省地中海贫血基因携带者及患者α和β珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断[J].中华妇产科杂志，2012,47(2):85-89.
[12]黄健云，莫和国，商璇，等.中山市小榄地区β-地中海贫血产前筛查和产前诊断状况[J].广东医学，2016,37(11):1695-1698.
[13]王霞，江虹，贾劲，等.四川地区人群地中海贫血的筛查及基因分析[J].生物医学工程学杂志，2011,28(1):135-137.
[14]肖莉.血液检验在贫血诊断与鉴别中的价值探析[J].中国民间疗法，2018,26(9):82-83.
[15]朱琦，曹永利，李娟.地中海贫血孕妇妊娠状况及对胎儿的影响分析[J].中国妇幼卫生杂志，2018,9(5):59-61.
[16]贺海林，陈剑虹，钟泽艳，等.红细胞参数及计算公式对缺铁性贫血与地中海贫血鉴别诊断效能比较[J].中国实验诊断学，2018,22(1):53-55.
[17]薛晶晶.血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的临床应用价值[J].黑龙江医药，2018,31(1):110-111.
[18]付月，刘文君.地中海贫血实验室诊断研究进展[J].中国实验血液学杂志，2018,26(2):631-636.
